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    超細粉碎機

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    低溫研磨機正確的實驗步驟分享
    發布時間:2018-08-30   點擊次數:982次
       低溫研磨機正確的實驗步驟分享
      低溫研磨機又叫全自動多樣品冷凍研磨儀,和液氮粉碎機類似,原理就是先把常溫下呈韌性、難以粉碎的物質,冷凍到脆化點以下,然后在低溫研磨機內被研磨到所需的細度,而且原成分不會破壞。并且在常溫下易燃易爆的物質,也能低溫粉碎,效果更為顯著。
      工作原理:
      低溫研磨機利用低溫凍結力,機械撞擊力,物里摩擦力將樣品磨碎。
      系統構成:
      低溫研磨機擁有五大系統,樣本研磨系統、液氮貯存系統、液氮控制系統、電路控制系統、保溫及保冷系統。
      應用范圍:
      低溫研磨機廣泛運用于生物/食物/農業/醫藥品/化學/合成材料/工程/電子/建筑原料/玻璃/陶瓷等行業。
      低溫研磨機實驗步驟:
      1、先將低溫研磨機上的制冷模塊預先置于-20℃,使用時取出安裝好。將研磨珠去RNA酶處理。
      2、隨機抽取小鼠的尾巴100μg,把樣本剪成盡可能小段,置于無RNA酶的2研磨單位離心管中(選擇耐液氮冷凍管子),同時加入1顆5號研磨珠和2顆3號研磨珠(如果選擇1.5研磨單位離心管,只需要加入4-5顆3號研磨珠)。
      3、放置于液氮中一起浸泡3分鐘,取出放置于預冷模塊中,在低溫研磨機上選擇13單位頻振研磨60s。(該步驟可以根據研磨的細微程度要求可以再重復一遍)。
      4、把研磨好的樣本加入0.06ml的PBS0.14ml的RNAiso Plus(此處選擇PBS,可以根據實驗需要加入其他提取液,如1ml TRIzol等),繼續置于低溫研磨機上選擇13單位頻振研磨60s。樣本將處于糊狀。(其他提取試劑有可能會出現泡沫,不影響實驗)。
      5、取出研磨管,放入冷凍離心機中,于4度,12000g離心10分鐘。
      6、小心吸取上清液0.1ml至新的1.5研磨單位離心管中,蓋上管蓋,在室溫上孵育15分種,使樣品充分裂解至勻漿液較透明,如果仍有少量顆粒屬于正常情況,不影響RNA提取質量和得率。
      7、在研磨單位離心管中加入0.02ml氯,蓋緊管蓋,振蕩混勻并將其在冰上孵育15分種,于4度,12000g離心15分鐘。離心后混合物分層:上清層,中間層,下層;RNA存在于上清層中。
      8、將上清層小心轉移到一干凈的離心管中,加入等體積冰浴的異丙醇,顛倒振蕩混勻,將混合的樣品在-20度條件,孵育20分種,于4度,12000g離心10分鐘。RNA沉淀通常形成片狀沉淀附著于管壁或管底。小心棄去上清,用1ML的冰浴75%的乙醇洗滌RNA沉淀一次,顛倒洗滌低溫研磨機的離心管管壁,并旋渦振蕩樣品,盡可能讓沉懸浮,于4度,12000g離心5分鐘,再次去除上清,晾干沉淀。
      10、在陰涼處適度干燥RNA沉淀(避免過分干燥,那樣會降底它的可溶性)。
      11、低溫研磨機用適量(一般可用0.01—0.02ml)的無RNA酶水或TE溶液來溶解RNA。抽提好的RNA,保存于-70度。

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